Bu kaydın yasal hükümlere uygun olmadığını düşünüyorsanız lütfen sayfa sonundaki Hata Bildir bağlantısını takip ederek bildirimde bulununuz. Kayıtlar ilgili üniversite yöneticileri tarafından eklenmektedir. Nadiren de olsa kayıtlarla ilgili hatalar oluşabilmektedir. MİTOS internet üzerindeki herhangi bir ödev sitesi değildir!

Apoptosis Marker’ı olan AnnexinA5’e karşı poliklonal antikor gelişimi

Diğer Başlık: Development of polyclonal antibodies against the Apoptosis Marker AnnexinA5

Oluşturulma Tarihi: 2017

Niteleme Bilgileri

Tür: Tez

Alt Tür: Yüksek Lisans Tezi

Yayınlanma Durumu: Yayınlanmış

Dosya Biçimi: PDF

Dil: Türkçe

Konu(lar): BİLİM, Biyoloji (Genel),

Yazar(lar): TUNCER, Ahmed Alperen (Yazar),

Emeği Geçen(ler): ARAS, E.Sümer (Tez Danışmanı),


Yayınlayan: Ankara Üniversitesi Fen Bilimleri Enstitüsü Biyoloji Anabilim Dalı Yayın Yeri: Ankara Yayın Tarihi: 2017 Yayınlandığı Sayfalar: 166 s.


Dosya:
file show file
Görüntüle
download file
Kaydet

Anahtar Kelimeler

Apoptosis, Etoposid, AnnexinA5, Fosfotidilserin, Western Blot, Poliklonal Antikor, Apoptosis, Etoposide, AnnexinA5, Phosphatidylserine, Western Blot, Polyclonal Antibody 


Özet

Apoptosis genel olarak, çok hücreli organizmalarda görülür ve genomik DNA’nın hücre çekirdeği içerisindeki bozulması şeklinde karakterize olur. Apoptotik sinyal, hücreyi ‘‘ölüme’’ sürükleyebilecek bir strese karşı cevap olarak ortaya çıkar. Bu tip DNA bozulmaları bir çok fizyolojik işleyiş ile olabileceği gibi, bir çok anti-kanser ajanın sitotoksik etkisi ile de meydana gelebilir.  Bu çalışmada apoptosis, hücre hatlarında Etoposid tarafından tetiklenmiştir ve AnnexinA5 ile doğrulanmak amaçlı kontrol edilmiştir. AnnexinA5, bütün hücre ölümlerinde hücre yüzeyinde ifadelenen fosfotidilserinleri tanıma özelliğinden dolayı, apoptosis tanısı için önemli bir görev teşkil etmektedir. Işık mikroskobisinde Etoposid’in Apoptosis’i tetiklediğini tespit etmek için hücre hatlarına belirli konsantrasyonlarda verilen Etoposid, 24 saatlik bir süre içerisinde aralıklı olarak kontrol edilmiştir. Apoptosis’in bu hücre hatlarında gerçekleştiğini doğrulamak için, AnnexinA5’in hayvan immünizasyonu için saflaştırılma ve poliklonal antikor üretim çalışmaları yapılmıştır. AnnexinA5’in saflaştırma işleminin ardından, Balb/C dişi fareler üzerinde immünizasyon gerçekleştirilmiştir. Balb/C dişi farenin karnında oluşan ‘‘ascites’’ sıvısı toplanmış, hedef antijenik bölgeye spesifik antikor üretildiğini göstermek için ascites sıvısı ve hücre hatlarından alınan örnekler western blot deneylerinde primer antikor olarak kullanılmıştır. Western blot sonuçlarında ascites sıvısı içerisindeki antikorların, Etoposid ile muamele edilmiş hücre hatlarından alınan antijen örneklerine etkili bir şekilde bağlandığı görülmüştür. Sonuçlar dahilinde biyoteknolojik yaklaşımlar kullanılarak poliklonal antikor üretim teknolojisi başarılı olarak uygulanmış ve üretilen antikorlar ile hücre hatlarında Etoposid’in Apoptosis’i etkin bir şekilde tetiklediği gösterilmiştir. 

Abstract

Apoptosis is general pathway of cell death in eukaryotes, characterized by internucleosomal digestion of genomic DNA. Apoptotic signal is produced against a stress condition which may lead the cell to ‘‘death’’. Such DNA digestion can be induced by both physiological stimuli and cytotoxic treatment with many anticancer agents.  In these studies, apoptosis was induced in cell cultures by Etoposide and AnnexinA5 is used to detect apoptotic cells. Hence AnnexinA5 can be used as a sensitive probe for phosphatidylserine exposure upon the cell membrane in all of the cell death mechanisms, this protein plays a central role to understand apoptosis. By treating cell cultures with certain concentrations of Etoposide in a 24h period, we aimed to detect if Etoposide induces Apoptosis or not. To prove that Apoptosis was triggered in these cell cultures, we performed purification and polyclonal antibody production assays for immunization of AnnexinA5 on mice. After purificiation of AnnexinA5, we performed immunization of Balb/C female mice. After harvesting ascites from female Balb/C mice’ abdomen, we used samples from cell cultures and ascites from mice as primer antibody in Western Blot assay to show the production of spesific antibody for antigenic target site. According to the Western Blot results, antibodies from the ascites successfully bind to antigenic samples from cell cultures treated with Etoposide. These results demonstrate the involvement of AnnexinA5 in Etoposide treated apoptotic cells and suggest mechanisms of annexin family via production of polyclonal antibodies by biotechnology techniques. 


İçindekiler



Açıklamalar



Haklar



Notlar



Kaynakça


Atıf Yapanlar

Gözat Sayfasına Dön

 

Sosyal Medya ve Araçlar

İstatistikler

  • Kayıt
    • Bu ay: 37
    • Toplam: 31057
  • Online
    • Ziyaretçi: 421
    • Üye: 0
    • Toplam: 421

Detaylı İstatistikler